【EPA1623方法的操作简介】

“EPA1623方法”是由美国国家的用于测定水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的标准方法。概况地说，该方法分为三部。，水样进行过滤收集水中的乱囊和孢囊；第二，利用免疫磁分离来纯化过滤样品；第三，对纯化的样品通过免疫荧光显微镜法来监测“两虫”的数量。

1、水样过滤

采用美国EPA推荐的PALL公司Envirochek-HV囊式滤器对水过滤，将卵囊、孢囊及其他无知收集在过滤器上。该过滤器可用于实验室批量水样的过滤，也可以用于野外现场水样的过滤。过滤后的囊式滤器，用洗脱剂将拦截在滤囊上的颗粒物震荡洗脱下来，并将洗脱物收集在一个250毫升的离心管中。

   Life Sciences

  ◇两虫检测囊式过滤器:水样过滤采用图2所示的方法将PALL公司囊式滤器（见图3）安装好，过滤器的滤囊用图4所示的震荡器进行洗脱分离。

  ◇特点

• EPA1622＆1623方法推荐产品。

• 1um孔径的改良滤膜能99%截留两虫。

• 一次性使用的设计避免了因其他因素的污染而造成的实验结果误差。

• 专用于源水与自来水的隐孢子虫与贾第鞭毛虫的浓缩与回收，使用简单、方便、快捷。

 2、免疫磁分离  
   离心管中的洗脱物通过离心分离作用，使颗粒物沉淀在离心管底部，同时去掉离心管中的上清液。将离心后的含有卵囊和孢囊的沉淀物用纯水混匀，并向其中加入Dynal公司的免疫磁分离试剂（Dynabeads GC-Combo试剂盒）进行磁分离。具体做法是：首先用带有抗体（抗隐孢子虫和贾第鞭毛虫）的特殊磁珠捕获沉淀物的卵囊和孢囊；其次通过Dynal公司的MPC-S磁粒浓缩器将捕获有卵囊和孢囊的磁珠吸附在试管壁上，去掉未被吸附在试管壁上含杂质的液体，以达到卵囊和孢囊从沉淀物中分离出来的目的；再次加入盐酸将管壁上捕获有卵囊和孢囊的磁珠进行洗涤，以使卵囊和孢囊从磁珠上解离出来；最后将含有卵囊和孢囊的纯化液转移至井形载玻片上进行制片。

   ◇隐孢子虫和贾第鞭毛虫的纯化—免疫磁分离技术:1999年美国在EPA1623方法中规定利用IMS{Immuo Magnetic Separation}免疫磁分离技术Dynabeads来分选检测饮用水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊，其原理是：利用带有特异性抗体的磁珠与样品中的目标产物G/C特异性抗原相结合，在磁场中搞笑选择中分离。
   3、IFA染色&镜检
   待井形载玻片的纯化液干后，用NaOH中和井形载玻片上样品，再用Dynal公司的Aqua-GloTMG/C染色试剂盒，将卵囊和孢囊在井形载玻片上用磁荧光标记的单性抗体和DAPI溶液着色后，盖上盖玻片。然后，OLYMPUS荧光和差分干涉相衬（DIC）显微镜对着色样本进行检测。观察样本，对符合卵囊和孢囊大小、外形、荧光特性的对象进行定性、定量分析。
   ◇研究型正置荧光生物显微镜系统:本实验中所配置的OLYMPUS正置阳光生物显微镜可以很好地完成明场和暗场显微镜观察，具有良好的可靠性、稳定性和实验室广泛应用等特性。显微镜数码照相部分所配置的数码照相机，为专业应用的高清晰度数码相机，采用不同于民用的数码数据采集及系统，此款相机的成像可达到1200万像素级别，并且在使用明场拍摄的同时可以可靠、稳定地完成荧光图像、暗场等特殊拍摄的要求，对实验图像数据的记录、再现和分析提供了很好的可能和保障；该相机的相关系统是目前应用比较普通、性能比较*的；如出现问题也方便维修和更换配件。配备微机及色彩打印系统。

• “EPA1623方法”所需部分产品信息